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培養(yǎng)基
人工配合各種營養(yǎng)物質(zhì)供微生物生長的基質(zhì)。培養(yǎng)基還可滿足微生物對部分環(huán)境條件,如pH值、氧化還原勢等的要求。根據(jù)營養(yǎng)成分的來源,有用純化學(xué)物質(zhì)配合的,成分穩(wěn)定的合成培養(yǎng)基有用動、植物體的組織或它們的煮汁、體液、土壤浸液等成分不明確,但能提供特殊營養(yǎng)的天然培養(yǎng)基;有以天然物質(zhì)為主,配以適量的化學(xué)物質(zhì),營養(yǎng)豐富的綜合培養(yǎng)基。在微生物的分類鑒定工作以及生理代謝和遺傳研究中,為便于分析其營養(yǎng)特性,采用成分穩(wěn)定的合成培養(yǎng)基為培養(yǎng)某些寄生性微生物或在原來生活環(huán)境中方能獲得的特殊有機營養(yǎng)而滿足其生長要求,采用某些天然培養(yǎng)基為迅速獲得生物量或為產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物,則選用營養(yǎng)較全面和豐富的綜合培養(yǎng)基。
接種與移植
移植系指從一培養(yǎng)物(原種培養(yǎng))移種于新培養(yǎng)基上,目的為得到繼代培養(yǎng)接種系指挑取被檢材料移植于培養(yǎng)基或活體而言,通常均混稱之為接種,泛指在無菌條件下,用接種環(huán)、接種針、移液管或滴管等接種工具,把微生物轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基或其他基質(zhì)上,這是微生物學(xué)重要基本操作。根據(jù)實驗?zāi)康牟煌臃N方式有劃線、穿刺和點接等。接種時通常都應(yīng)在無菌室或超凈工作臺上進行,應(yīng)嚴格注意無菌操作。
通常將保藏的某菌種移植在斜面或液體培養(yǎng)基中擴大后,用以接種新的培養(yǎng)基,使獲得大量生長,發(fā)生某種生理作用或產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物。細菌和酵母菌用對數(shù)生長期的細胞作母種接種在新的培養(yǎng)基中,可縮短滯留適應(yīng)期,提早以對數(shù)生長速度增殖。接種量九在培養(yǎng)基中達到一定生長量所需的時間短。真菌和放線菌通常都以孢子期作原種保藏用孢子接種使發(fā)育成菌絲體后,用菌絲體接種新的培養(yǎng)基。
由于各類微生物的生活習(xí)性不同,也因培養(yǎng)目的不一,常選用不同的培養(yǎng)方法。
表面培養(yǎng)
好氣性和兼嫌氣性微生物在固體培養(yǎng)基平皿表面生長形成菌瀛或在斜面上形成菌苔,以及在液體培養(yǎng)基表面形成菌膜或菌環(huán)等形態(tài)結(jié)構(gòu),觀察它們的生長習(xí)性和比較它們的生長速度和生長量。在分離和純化這些微生物種時,常用系列稀釋的菌液接種瓊脂培養(yǎng)基,傾注平皿后,在培養(yǎng)基表面發(fā)育分散的菌落中,挑取單菌落進行分離和純化,也可計數(shù)平皿表面菌落數(shù),乘以稀釋倍數(shù),計算原菌液中的活菌數(shù),在保藏菌種時,則常在瓊脂培養(yǎng)基的斜面上接種,經(jīng)培養(yǎng),使長出豐滿的菌苔后,保藏。
液體振蕩培養(yǎng)
好氣性或兼嫌氣性微生物在淺層液體培養(yǎng)基中,通過機械振瀛增加培養(yǎng)液的通氣量,使能獲得足夠的氧和均勻地接受營養(yǎng)物質(zhì)而迅速生長繁殖,可作擴大菌種、增加生長量的需要,也用于代謝生理的研究,分析和,提取代謝產(chǎn)物。
液體深層培養(yǎng)
以獲得大量發(fā)酵產(chǎn)物為目的的發(fā)酵罐大容量液體培養(yǎng),對嫌氣性細菌如丁醇丙酮梭菌,保持發(fā)酵罐中深層培養(yǎng)液的缺氧條件,調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的合適pH值和溫度,使丁醇丙酮梭菌在嫌氣環(huán)境中能迅速生長,發(fā)酵淀粉和糖類產(chǎn)生丁酸和丙酮。對好氣性和兼嫌氣性微生物,則開動發(fā)酵罐的通氣和攪拌裝置,將壓縮在儲氣罐內(nèi)經(jīng)過濾除菌后的空氣通入發(fā)酵罐內(nèi),以控制空氣流量,調(diào)節(jié)罐內(nèi)培養(yǎng)液中的供氧量。一方面保持微生物生長發(fā)育所需的適量氧氣;另一方面也利用壓縮空氣的流入而使培養(yǎng)液翻攪,上下混和,均勻分布營養(yǎng)物質(zhì)促使迅速生長,增加生物量,產(chǎn)生多量代謝產(chǎn)物,是發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)的基本培養(yǎng)方法。